Az első terem a Stanza della Segnatura-t eredetileg könyvtárnak építették, de itt írták alá az egyházi udvar rendeleteit is. Innen ered a terem neve (segnatura, magyarul aláírást jelent). Két óriási (az Athéni iskola és a Disputa a keresztény vallás diadala) és két kisebb falfestmény (a Parnasszus és az Erények) található itt, a mennyezet képei és a lábazat egyszínű képei 1508–1511 között készültek. A terem festményének fő motívuma a fő a mennyezeten kezdődik: négy nőalak személyesíti meg a teológiát, filozófiát, költészetet és jogtudományt. A témák részletesen a négy falon folytatódnak.
A Stanza di Elidoro Szent Péter megszabadulásának drámai jelenete, a Bolsenai mise aszimmetriája és az Attila seregeinek visszafordítása tömegjelenete.
Raffaello a Stanza dell' Incendio képeit, a loggiák díszeinek megfestését és a Villa Farnesina Psyché-sorozatát tanítványaira bízta.
* Az athéni iskola (készült: 1509–1511, jelenleg a vatikáni Stanzákban látható);
* Szent család (más néven a festmény „La Perla” (A gyöngy) néven is ismert, a madridi Prado Múzeumban látható);
* Ezékiel látomása (Pitti, Firenze)
* Kardinális (készült: 1511 körül, jelenleg a Pradóban látható);
* A szép kertésznő (készült: 1507-ben , jelenleg a párizsi Louvre-ban látható.